Comment mesurer la protéine ?

Mesure de la concentration en protéines : techniques spectrophotométriques, colorimétriques et fluorimétriques

Les protéines, molécules essentielles dans les processus biologiques, sont présentes dans tous les organismes vivants. La détermination de leur concentration est cruciale dans divers domaines de recherche et d’analyse biochimique. Voici les principales techniques utilisées pour mesurer la concentration en protéines :

Spectrophotométrie UV-visible

Ce procédé mesure l’absorption de la lumière ultraviolette (UV) à une longueur d’onde de 280 nm. Les protéines absorbent la lumière à cette longueur d’onde en raison de la présence des acides aminés aromatiques tryptophane et tyrosine. En mesurant l’absorbance à 280 nm, il est possible de déterminer directement la concentration en protéines dans un échantillon.

Méthodes colorimétriques

Les tests BCA (bicinchoninique) et Bradford sont des méthodes colorimétriques indirectes. Elles reposent sur la réaction d’ions cuivreux avec des groupements peptidiques dans les protéines. Cette réaction produit un complexe coloré dont l’absorbance est proportionnelle à la concentration en protéines.

Fluorimétrie

Cette technique utilise des fluorophores (molécules émettant de la fluorescence) qui se lient aux protéines. Lorsqu’elles sont excitées par une lumière de longueur d’onde spécifique, les fluorophores émettent une fluorescence mesurable. L’intensité de la fluorescence est directement proportionnelle à la concentration en protéines.

Choix de la technique

Le choix de la technique appropriée dépend de facteurs tels que la sensibilité requise, la simplicité d’utilisation et le coût.

• Spectrophotométrie UV-visible : Technique directe et relativement simple, souvent utilisée pour les mesures de routine.
• Tests colorimétriques : Moins sensibles que la spectrophotométrie UV-visible, mais plus robustes et moins coûteux.
• Fluorimétrie : Technique très sensible, mais qui peut être plus complexe et coûteuse.

En conclusion, la détermination de la concentration en protéines peut être effectuée à l’aide de diverses techniques, dont la spectrophotométrie UV-visible, les méthodes colorimétriques et la fluorimétrie. Le choix de la technique optimale dépend des exigences spécifiques de l’application.