Comment savoir si les cellules en suspension sont confluentes ?

Déterminer la confluence des cellules en suspension : un indicateur clé pour des cultures saines

Contrairement aux cellules adhérentes qui forment une monocouche observable sur une surface, les cellules en suspension prolifèrent librement dans le milieu de culture. L’évaluation de leur confluence, cruciale pour maintenir des cultures saines et performantes, ne repose donc pas sur l’observation d’une surface recouverte. Comment alors déterminer le moment optimal pour le repiquage ?

L’indicateur principal de confluence pour les cellules en suspension est le trouble du milieu de culture. Après une légère agitation du flacon, un milieu trouble, voire opaque, signe une densité cellulaire élevée. Cette turbidité est le résultat de l’accumulation des cellules en suspension et, parfois, de la formation de petits agrégats. Observer cette turbidité est une méthode simple et rapide pour estimer la confluence. Plus le milieu est trouble, plus la population cellulaire est dense.

Cependant, se fier uniquement à l’aspect visuel peut être trompeur. Un milieu légèrement trouble peut aussi indiquer une contamination bactérienne ou fongique. Il est donc essentiel d’associer l’observation de la turbidité à un suivi régulier de la croissance cellulaire à l’aide d’un compteur de cellules automatisé ou manuel (hématimètre). Ces méthodes permettent une quantification précise de la densité cellulaire et confirment l’état de confluence.

Le repiquage des cellules en suspension doit idéalement intervenir avant que le milieu ne devienne trop trouble, c’est-à-dire pendant la phase de croissance logarithmique. À ce stade, les cellules prolifèrent activement et sont dans des conditions optimales pour s’adapter à un nouveau milieu. Attendre une confluence trop élevée peut entraîner un stress cellulaire, une diminution de la viabilité et une modification du phénotype.

En conclusion, la confluence des cellules en suspension se manifeste par un trouble du milieu de culture après agitation. Néanmoins, il est indispensable de combiner cette observation visuelle avec des mesures plus précises de la densité cellulaire pour un suivi optimal des cultures et un repiquage au moment opportun, garantissant ainsi la santé et la performance des cellules. Négliger ce suivi peut compromettre la qualité des expériences et la reproductibilité des résultats.