Comment calculer le volume du système en HPLC ?

Calcul du volume du système en chromatographie liquide à haute performance (HPLC)

Le volume du système en HPLC joue un rôle crucial dans l’optimisation des performances chromatographiques. En comprenant ce volume, les chromatographistes peuvent déterminer le volume d’injection optimal pour minimiser la dispersion des pics et maximiser la sensibilité.

Estimation du volume mort

Le volume mort est le volume interne du système HPLC qui n’est pas occupé par la phase stationnaire. Il comprend le volume du tube d’injection, des lignes de raccordement, du détecteur et de la colonne chromatographique.

Pour les colonnes standard en HPLC (4,6 mm x 150 mm), le volume mort est généralement estimé à environ 60 % du volume de la colonne. Pour une colonne de 150 mm de long, cela représente environ 1,5 mL.

Détermination du volume du système

Pour déterminer le volume du système, il est nécessaire d’effectuer une injection de solvant pur et de mesurer le volume d’effluent collecté avant l’apparition du pic de solvant. Ce volume correspond au volume mort, plus le volume d’effluent collecté dans la boucle d’injection.

En soustrayant le volume de la boucle d’injection du volume d’effluent collecté, on obtient le volume mort du système.

Volume d’injection optimal

Le volume d’injection optimal est généralement inférieur à 15 % du volume mort. En suivant cette règle, on évite une dispersion excessive des pics due à l’élargissement de la bande. Pour une colonne avec un volume mort d’environ 1,5 mL, le volume d’injection optimal serait inférieur à 15 µL.

Importance du volume du système

Un volume du système bien compris permet aux chromatographistes d’optimiser :

• La sensibilité en minimisant la dispersion des pics
• La résolution en réduisant l’élargissement des bandes
• La reproductibilité en garantissant des volumes d’injection constants

En calculant précisément le volume du système et en sélectionnant le volume d’injection approprié, les chromatographistes peuvent améliorer considérablement les performances globales du système HPLC.