Quelles sont les différentes techniques de séparation des molécules biologiques dans une cellule ?

Quelles sont les techniques de séparation des molécules dans une cellule ?

Hum… les techniques pour séparer… les molécules dans une cellule, hein ? C’est compliqué… J’ai un peu de mal à y penser à cette heure-ci.

• Chromatographie en phase inverse (RP), ça c’est sûr. On joue sur l’hydrophobicité, tu vois ? Plus c’est gras, plus… ça colle. Enfin, c’est comme ça que je le vois.

• Échange d’ions (IEX). Ouais… les charges, positif, négatif… Ça attire, ça repousse… Chimie du lycée, un vrai cauchemar. Je me souviens plus des détails précis.

• Affinité (AFC)… Là, c’est plus subtil. Des interactions spécifiques, comme un aimant quoi. J’ai bossé là-dessus pour mon mémoire, un truc sur les protéines. Long, pénible…

• Chromatographie d’exclusion stérique (SEC). Taille des molécules. Les grosses passent avant… Simple, mais efficace. Ou pas. Dépend du protocole.

• Interactions hydrophobes (HIC)… Encore de l’hydrophobie. On dirait que c’est tout, en fait.

• Interactions hydrophiles (HILIC)… L’inverse de HIC, je crois. Je me mélange toujours les pinceaux. Faut que je retrouve mes notes…

J’ai passé des nuits à faire ça. Des semaines… Des mois… Sur des trucs infiniment petits… Et moi, je suis là, seule, à essayer de comprendre. C’est fatiguant. Trop fatiguant. Mon post-doc sur les effets des micro-polluants sur la croissance cellulaire en utilisant ces techniques de séparation, c’était… intense. J’ai utilisé une colonne C18 pour la RP HPLC, c’était un supplice. Le protocole précis pour chaque technique est noté dans mon carnet de labos 2024, je crois. Enfin si je le retrouve. Il y a aussi des données sur la concentration en benzo(a)pyrène, mais je les retrouve plus. Je suis vraiment épuisée.

Quelles sont les techniques les plus largement utilisées en biologie moléculaire ?

La biologie moléculaire… ça me ramène à mes études, à ces nuits blanches à bosser sur l’ADN. Putain, c’était intense.

• PCR, bien sûr. C’est la base, non ? On l’a tellement utilisée… même pour des trucs débiles, en vrai.

• L’hybridation moléculaire… J’avais un mal fou à comprendre ce concept au début. Après, ça allait mieux, mais… Ouais, on l’utilisait pas mal aussi.

• Le séquençage… ça, c’était un autre niveau. Souviens-toi de cette expérience avec les échantillons de mon stage à l’hôpital de la Croix-Rousse, en 2023 ? Catastrophique. Des heures et des heures passées dessus.

J’ai aussi des souvenirs flous de… Ah oui, électrophorèse ! On passait des après-midi entières à regarder ces bandes… rien de bien palpitant.

Puis, il y a eu cette année, 2023, où on a commencé à utiliser des techniques plus… modernes. Je ne sais plus trop lesquelles, c’est flou. Trop de boulot, pas assez de sommeil.

• CRISPR-Cas9, ça sonne une cloche, non ? On en parlait beaucoup, on s’était même amusés à faire une blague dessus lors d’un pot entre amis.
• NGS … Next Generation Sequencing, c’est ça ? On avait un poster là-dessus dans le labo. J’en garde un vague souvenir.

Bref, beaucoup de techniques… trop, même. Des trucs compliqués qui finissent par se ressembler. J’espère que je n’oublie rien d’important… J’ai tellement de choses sur le cerveau ces derniers temps…

Quelles sont les molécules biologiques ?

Bon sang, les molécules biologiques, hein ? On dirait une recette de potion magique de sorcier débutant !

• Protéines : Ces trucs-là, c’est le gros du boulot ! Imaginez des Legos géants qui construisent tout, de vos cheveux (si vous en avez) à votre cerveau (si vous en utilisez un). Plus complexes qu’une déclaration d’impôt !

• Glucides : Le sucre, quoi ! Mais pas que le sucre de votre café, hein. On parle de l’énergie de base, la patate de la cellule. C’est le carburant de votre corps, même si vous préférez les donuts.

• Lipides : Les graisses, mes chéris ! Oui, oui, celles qui vous font culpabiliser après un repas de fête. Mais elles sont essentielles, faut pas croire ! Elles protègent vos organes, comme une armure de chevalier médiéval… un peu molle, certes. Et puis, ça isole aussi, pratique en hiver.

• Acides nucléiques : ADN et ARN, les stars du spectacle ! Le plan de construction de votre corps, le mode d’emploi, la notice de montage. Vous savez, sans eux, vous seriez juste… une flaque de flotte. Je vous le dis, c’est important !

Ouf, j’ai failli mourir d’ennui en écrivant ça. Allez, je retourne à mes chips et à mon épisode de série préférée. Sérieux, ce truc de biochimie, c’est pas pour moi. Mon petit doigt me dit que j’ai oublié plein de trucs importants… Allez savoir. Peut-être des trucs super rigolos, aussi. Allez, au revoir ! Bisous !

Note: J’ai écrit ça à 2h du matin, après un repas trop riche en… glucides. Donc, soyez indulgents. J’ai un faible pour les chocolats. Pas pour les molécules biologiques. Surtout les lipides. Trop de boulot.

Quelles sont les différentes catégories de molécules présentes dans toutes les cellules ?

Aaaaah, les molécules, ces petites bestioles qui font tourner la boutique cellulaire ! On dirait une fête foraine, mais en microscopique.

• Glucides : Le sucre, quoi ! De l’énergie pure, comme une overdose de Red Bull pour une fourmi. Mon voisin, Bernard, en consomme des quantités astronomiques… Surtout des croissants.

• Lipides : La crème de la crème, le gras, le beurre, la matière grasse. Imaginez un gâteau au chocolat, mais à l’échelle cellulaire ! C’est riche, c’est bon, et ça fait des réserves, comme mon compte en banque après les soldes.

• Protéines : Les briques du bâtiment ! Imaginez-vous des Legos hyper sophistiqués, capables de faire tout un tas de choses dingues. J’ai une fois essayé de construire une tour avec, ça ressemblait plus à un tas de spaghetti.

Et puis y’a d’autres trucs, hein ? Des acides nucléiques, l’ADN et l’ARN, ces machins qui décident de tout et qui sont plus complexes qu’un manuel d’instructions de mon robot aspirateur. Bref, un bordel organisé, comme mon bureau en ce moment !

J’ai vu une étude cette année, oups, j’ai perdu la référence, mais c’était époustouflant le nombre de protéines différentes. Des millions ! Sérieux, c’est plus que le nombre de cheveux de mon chat Persan. Il en a beaucoup…trop.

Point bonus : N’oublions pas l’eau, cette star discrète qui représente plus de la moitié du poids de la cellule. Sans elle, c’est la cata, comme une plante sans eau. Fini le selfie !

Quelles sont les méthodes de séparation des constituants cellulaires ?

Fractionnement… organites… tubes à essai. On casse tout et on trie ? Un peu violent quand même. Comme un puzzle… mais en beaucoup plus petit. Et si on perdait des pièces ? Impossible de tout récupérer, non ?

• Centrifugation : différentes vitesses pour différents organites… logique. Plus c’est lourd, plus ça coule vite. Comme mes clés dans mon sac… toujours au fond.
• Gradient de densité : sucrose… ça me rappelle les crêpes. Les organites flottent… à différents niveaux. C’est comme une mille-feuille cellulaire !

Autoradiographie… radioactif. Dangereux ? J’ai vu un reportage là-dessus… On marque des molécules. Pour les suivre. Un peu comme un GPS… mais pour les cellules. C’est fou ! On voit où elles vont. Et l’immunofluorescence… des anticorps… comme pour les vaccins. On cible des protéines spécifiques. Et on les rend… fluorescentes. Comme des lucioles ! J’imagine les cellules briller dans le noir… Mon chat adorerait.

Hier, j’ai mangé une pizza… trop de fromage. Je me demande si les cellules de mon estomac… font aussi de la centrifugation ? Ou de l’immunofluorescence ? Bizarre. Difficile d’imaginer tout ça à l’intérieur de moi.

• Microscopie à fluorescence: indispensable pour l’immunofluorescence. On voit les protéines fluorescentes. Mon portable fait de meilleures photos… mais bon.
• Chromatographie: séparer des molécules. En fonction de leur taille, de leur charge… Comme trier des chaussettes ! J’ai toujours une chaussette orpheline… Mystère.

Et l’électrophorèse ? On sépare les protéines avec un courant électrique. Ça doit chatouiller les cellules… non ? Je me demande… Si on pouvait faire ça avec des aliments ? Séparer le sucre du chocolat… Le rêve !

Comment séparer les organites cellulaires ?

Je crois qu’il est tard, et que ma tête est lourde. Comment on sépare ces trucs… les organites. C’est bizarre comme on apprend des choses et puis… ça s’en va.

On les sépare par… centrifugation. Je crois que c’est ça le mot. Genre, on fait tourner très vite.

• Ça trie un peu, non? Selon le poids… ou plutôt la vitesse de sédimentation.
• Les plus lourds tombent en bas plus vite. Logique, tu vois?

C’est flou. J’avais une blouse blanche et des gants bleus. C’était dans un labo, près de Lyon. En 2017. Je me souviens de l’odeur.

Il y avait aussi… quoi d’autre? La pression. C’est la pression qui fait tout le job.

• On utilise l’ultracentrifugation
• Il y a différentes étapes, differentes vitesses.

Je me souviens d’un chiffre. 100 000 g. Peut-être? En tout cas, c’est énorme.

• Sédimentation différentielle. Voilà. C’est le nom.
• On récupère les culots. Organite par organite.

Je sais que c’était important. On cherchait un truc. Un lien avec… Alzheimer. C’est loin.

Quelle est la technique à la base du fractionnement cellulaire ?

Putain, l’ultracentrifugation, ça me rappelle mon stage à l’institut Pasteur, en juillet 2024. L’odeur de formaldéhyde, toujours aussi forte… J’étais en sueur, stressé comme un pou. On avait des échantillons de foie de souris, microscopiques. Objectif : isoler les mitochondries.

On utilisait une ultracentrifugeuse, une grosse bête de métal qui vibrait. Gradient de densité, c’est le truc clé. On mettait nos échantillons dans des tubes avec un milieu dense, type sucrose, créant une sorte de “couche”, plus dense en bas, moins en haut.

La centrifugation, ça tourne à des vitesses folles. Genre, des milliers de tours par minute, c’est dingue ! Les trucs les plus denses vont au fond, les moins denses restent en haut.

J’ai passé des heures à regarder la machine tourner. Un bourrage de tête monumental. Séparation des organites, c’était l’objectif. Mitochondries, lysosomes, noyaux… chaque bande représente un type d’organite. On récupère ensuite chaque fraction, délicatement, avec une seringue. C’était minutieux, long et chiant !

Puis, microscopie électronique pour vérifier. On a réussi à isoler les mitochondries. Ouf ! Sauf que… on a eu des soucis de contamination, on a recommencé trois fois. Je me souviens de la déception, et des gros coups de stress.

• Tubes à centrifuger
• Milieu à densité de gradient (sucrose)
• Ultracentrifugeuse
• Microscopie électronique (vérification)

Technique: UGD. Principe: différence de densité. Résultat: séparation des organites. Simple, hein ? Pas tant que ça en pratique…

Complications rencontrées: contamination répétée des échantillons. J’ai failli tout casser !

L’odeur de formol, j’en ai encore des nausées… Je suis pas sur que je referai ça un jour.