Comment choisir la concentration du tampon ?

Quelle concentration de tampon choisir ?

Le choix du tampon, c'est un peu une prise de tête parfois. Je me rappelle, 20 juillet dernier, au labo de la fac, j'ai galéré une heure. J'avais besoin d'un pH stable autour de 7,4 pour mes cultures cellulaires.

Le pKa entre en jeu, évidemment. C'est lui qui dicte la force de l'acide. Plus le pKa est proche du pH souhaité, mieux c'est. La température jouait aussi un rôle, il faisait une chaleur pas possible ce jour-là.

Et il y a les exigences de pureté. Pour les cultures cellulaires, faut être super rigoureux. J'ai finalement opté pour un tampon HEPES, plus cher (12€ les 500ml), mais plus adapté.

Comment choisir le meilleur tampon pour une solution ?

pKa… ok. Force de l’acide. pH aussi. Concentration… température… On oublie souvent la température ! Mon café est froid. Faut que j’en refasse un. Solution tampon… C’est quoi déjà ? Ah oui, pour stabiliser le pH. Important pour mes manips de biochimie.

• pKa proche du pH souhaité. C’est la base.
• Température : ça influence le pKa. Vraiment. Faut vérifier les tables. J’ai perdu mon stylo… Où il est ?
• Concentration : Plus concentré, mieux c’est ? Pas forcément… Solubilité… interactions…

Hier, j’ai raté mon western blot. Les anticorps… Dilution… tampon… J’ai utilisé du PBS. Classique. Mais peut-être pas le meilleur choix. Tris… HEPES… MOPS… Tellement de choix !

• Pureté : qualité du tampon. Pour certaines applications, c’est crucial. PCR… séquençage…
• Réglementation : Si c’est pour un médicament… c’est pas pareil. Normes… J’ai vu un article là-dessus. Faut que je le retrouve.

J’ai commandé de nouveaux réactifs. Arrivée prévue demain. Espérons que ça marche mieux cette fois. Le pKa du Tris est autour de 8,1 à 25°C. Je dois préparer une solution à pH 7,4. C’est bon ça. Enfin, j’espère. Il faut aussi penser à la force ionique. Sel… NaCl… KCl… On verra bien.

Comment choisir son tampon ?

Alors, pour choisir ton tampon, c'est pas si compliqué en vrai, mais bon faut faire attention à un truc important. C'est surtout une question d'absorption, tu vois.

• Faut toujours commencer par le minimum, genre le plus léger quoi.

• Si t'es obligé de le changer tout le temps (genre toutes les trois heures, c'est trop !) ben, là, oui, tu passes à un niveau au-dessus.

C'est pas une science exacte, hein. Moi, perso, je prends toujours ceux avec applicateur, je trouve ça tellement plus simple. Et puis, j'ai une copine, Léa, elle, elle jure que par les tampons bio, genre coton 100% bio. Elle dit que c'est meilleur pour la planète et pour sa santé. Je sais pas trop, mais elle a l'air convaincue. Ah oui et attention au Syndrome du Choc Toxique (SCT), c'est rare, mais faut pas laisser un tampon trop longtemps !

Comment déterminer une solution tampon ?

Ouais, alors pour les solutions tampons, c'est un peu chiant à expliquer, mais bon, je vais essayer. Genre, tu sais, pH = pKa, c'est la base, on l'a tous vu en cours, non ? Mais comment on trouve ça en pratique ?

Euh, c'est lié à la concentration de AH et A-, les trucs qui font le tampon quoi. Il faut que les concentrations soient, euh... proches, quoi. Pas forcément égales, mais proches. Sinon ça marche pas super bien. J'avais fait un TP dessus l'année dernière, avec de l'acide acétique et de l'acétate de sodium, si tu vois ce que je veux dire... un vrai bordel.

Pour trouver le pH, ben... c'est la formule de Henderson-Hasselbalch que tu dois utiliser. Enfin, si tu veux être précis. Sinon, on peut arrondir, à vue de nez, surtout si les concentrations sont vraiment similaires.

• Concentration de AH
• Concentration de A-
• La formule, c'est du calcul, je t'assure. Avec des logarithmes et tout...

Bref, tu as besoin des concentrations de tes deux espèces. J'ai fait une manip l'année dernière, avec de l'acide citrique à 0.1 mol/L et du citrate de sodium à 0.05 mol/L j'avais trouvé un pH aux environs de 3,5. Approximatif, hein. J'avais pas trop vérifié sur mon calculeuse, j'étais pressée.

Et puis, il y a aussi des tableaux, des trucs pour lire directement, mais bon... c'est plus long. Faut trouver le bon couple AH/A- en fonction du pH que tu veux obtenir. Choisir le bon couple acide/base, c'est primordial. C'est souvent dans les annales, cette question là.

Enfin voilà, c'est assez flou, désolée. J'espère que tu comprendras quand même. J'ai pas trop le temps là, faut que je file en cours de chimie organique. C'est plus relou que la chimie générale, crois moi !